1. 等电点 pI

• 定义：蛋白质在特定 pH 值下，净电荷为零（正负电荷相等）的点。

pI = \frac{1}{2}pK_1 \cdot pK_2

• 重要性：

  • 等电点时溶解度最低，易沉淀。

  • 在电泳技术中，迁移率最小。

2. 沉淀

• 定义：在高盐浓度、极端 pH 或等电点附近，蛋白质溶解度降低而析出。 （二、三、四级结构被破坏）

• 本质：包裹在蛋白质内部的疏水基团暴露

• 应用：用于蛋白质纯化和浓缩，如等电点沉淀法。

蛋白质沉淀属于一级反应

3. 变性

• 定义：外界条件（如高温、强酸碱、化学试剂）破坏蛋白质高级结构，但一级结构和部分二级结构保留。

  • 影响：

    1. 空间构象破坏，导致生物活性丧失。

    2. 主要涉及二硫键和非共价键的断裂。

    3. 变性后溶解度降低、黏度增加、结晶能力丧失，易被蛋白酶水解。

4. 紫外吸收峰

• 有紫外吸收的条件：结构中有共轭双键（芳香）

• Tyr、Trp：紫外吸收峰在 280nm 处

• Phe：紫外吸收峰在 259nm 处

核酸的共轭双键在碱基中，紫外吸收峰在 260 nm 处

5. 茚三酮反应

此反应可用于定量氨基酸

• 反应物：氨基酸 + 茚三酮

• 条件：加热

• 产物：蓝紫色化合物（在 570 nm 处有紫外吸收峰）

6. 蛋白质的定量方法

1. BCA：双缩脲反应

2. 考马斯亮蓝法

3. UV 法：测 280 nm 处的紫外吸收